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Motilidad, Concentración y Recuento de Células Redondas

Análisis de motilidad y concentración se realiza a partir de la muestra en cámara Makler, donde posteriormente se analizarán solo espermatozoides que tienen cola. La movilidad espermática se mide en diferentes grados de movilidad: mótiles progresivos, mótiles no progresivos e inmótiles, clasificando ~200 espermatozoides a 37°C.

El recuento de células redondas (leucocitos, epitelio germinativo y epitelio del tracto reproductor) se determinan en la misma muestra que se monta en microscopios de campo claro y objetivos 20x.

Vitalidad

La vitalidad espermática se determina a través de un protocolo de tinción con eosina y observación por microscopía de contraste de fases. Espermatozoides muertos se definen por membranas plasmáticas dañadas que permiten la entrada del colorante y se observa la cabeza brillante al microscopio, mientras espermatozoides vivos con membranas intactas excluyen el colorante, observándose de color oscuro las cabezas.

Morfología

El espermatozoide humano normal se define por una serie de parámetros [Menkveld et al 1991]: (i) una cabeza ligeramente ovalada (largo 5- 6 μm, ancho 2.5-3.5 μm), (ii) un acrosoma que cubre 40-70% de la parte apical, (iii) una pieza media axialmente unida a la cabeza (grosor <1 μm, largo 1.5 x largo de cabeza), (iv)  remanentes o gotas citoplasmáticas de un tamaño 50% menor que la cabeza, (v) la cola con un largo de ~45 μm, ligeramente más gruesa en la pieza media, sin enrollamientos o giros.

Fragmentacion del ADN

Existen alteraciones estructurales anormales en la cromatina como deleciones en los cromosomas que hacen que la capacidad fecundadora de los espermatozoides disminuya, y con ésto, la probabilidad de la llegada a término del embarazo. Se ha establecido que para que ésto no suceda,  el valor no debería exceder un 30% de fragmentación del ADN, aproximadamente.

La evaluación de la fragmentación del ADN se realiza mediante la técnica del ensayo de dispersión de la cromatina (SDC), donde los espermatozoides con ADN intacto forman halos de dispersión de la cromatina, y los espermatozoides con ADN fragmentado formarán halos casi imperceptibles, o en su mayoría, no lo formarán. Posteriormente a la captura de imágenes en campo claro con 10x y 20x, se cuantifica los halo positivo y halo negativo para ~1000 y ~400 espermatozoides, respectivamente.

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